Наименьший процент продуктов с ботаническим названием Santalum album , включенных в описание, цена которых была слишком низкой, учитывая стоимость производства сандалового масла, отмечается на немецких сайтах (4%).Десять процентов товаров этого типа было найдено как на польских, так и на английских сайтах.

Средняя цена за 1 мл сандалового масла под ботаническим названием Santalum album , которое может считаться надежным в соответствии с критериями данного исследования, была самой низкой на польских веб-сайтах — 28,19 злотых и самой высокой на веб-сайтах на английском языке. по 50,79 злотых. На сайтах на немецком языке средняя цена за миллилитр масла составляла 45,35 злотых. Подобная зависимость наблюдается и для продуктов, которые стоят менее 21 злотого / мл, хотя производителями заявлено ботаническое название Santalum album .Среди этих продуктов средняя цена также значительно выше для масел, продаваемых на английских сайтах, то есть 11,25 злотых / мл, по сравнению с польским и немецким онлайн-рынками, где значения сопоставимы: 7,36 злотых / мл и 7,60 злотых / мл. , соответственно.

Частой причиной того, что данный продукт не считается качественным сандаловым маслом, является отсутствие ботанического названия на веб-сайте дистрибьютора, что особенно заметно на немецких веб-сайтах (26% продуктов).

Смеси масел в растительном масле с описанным составом чаще всего встречаются на англоязычных сайтах (10%), а также продукт, описываемый как синтетическое масло.На одном польском сайте продавалось масло, описание которого содержало противоречивую информацию о масличном комбинате. На фото упаковки масла было другое ботаническое название, чем в тексте, описывающем свойства масла. Хорошо описанные смеси появились на 6% польских сайтов.

На покупку масла на определенном сайте влияет его позиция. На веб-сайтах на польском языке первые три масла, соответствующие критериям качества, занимали 10, 12 и 14 места соответственно в списке поисковых сайтов; на немецких сайтах первые три качественных масла занимали 1, 3 и 4 позиции соответственно; на англоязычных сайтах они занимали 2-ю, 6-ю и 7-ю позиции соответственно (табл. 1).

5.Обсуждение

Масло сандалового дерева широко используется и может быть использовано в натуральной медицине, особенно в ароматерапии. Более того, современная наука продемонстрировала преимущества его применения в дерматологии, косметологии и даже онкологии [27]. Масло сандалового дерева может использоваться профессионалами, но также обычно без специальной подготовки, например, в саунах или для ароматизации воздуха. Продавцы эфирного масла должны предоставлять качественный продукт и основную информацию для безопасного использования. Однако продавцы сандалового масла не справились с проблемами в отношении качества и описания продукта.Каждый из проанализированных онлайн-рынков имел серьезные недостатки, хотя авторы оценили польский рынок как худший с только 8% продуктов, заслуживающих доверия, и английский рынок как лучший (38% продуктов, заслуживающих доверия).

Веб-сайты, распространяющие вещества, называемые «сандаловым маслом», в основном на английском и польском языках, описывают свойства этих масел. На немецкоязычном рынке такое описание встречалось значительно реже и занимало лишь 66% страниц. В этом исследовании не проводилась детальная оценка информации о сандаловом масле на веб-сайтах, но беглый анализ показал, что большинство из них описывают антидепрессантные, седативные и антисептические свойства, которые веками были известны натуральной медицине [3, 4, 7 , 9].Этот феномен, несомненно, полезен; Это позволяет нам узнать богатство масла для тех, кто недавно познакомился с ароматерапией. Такое описание также может вдохновить на более глубокие знания и привести к более надежным исследованиям, чем веб-сайты продавцов эфирных масел.

Использование эфирных масел связано с риском аллергических реакций, раздражения или фотосенсибилизации, особенно при их неправильном применении, например, в неразбавленном виде [10]. Несмотря на относительно сильный эффект масла сандалового дерева, связанный с его богатым составом, только небольшая часть польских и немецких веб-сайтов содержала описание правил безопасности использования этого продукта.На большинстве страниц даже не упоминается о необходимости разбавления эфирного масла, что является основным принципом ароматерапии [28]. Предполагаемый критерий, спецификация ограничений безопасности при использовании масла сандалового дерева, в наибольшей степени соблюдался на англоязычных веб-сайтах (56%), что свидетельствует о том, что английские дистрибьюторы наиболее осведомлены о рисках, связанных с ненадлежащим использованием этого масла. Эта зависимость также может быть связана с более строгими законами в англоязычных странах, особенно в США, с точки зрения ответственности производителя за безопасность своей продукции.

Все косметические продукты, в состав которых также входит масло сандалового дерева, должны иметь описание, соответствующее рекомендациям Международной номенклатуры косметических ингредиентов (INCI). Согласно этим правилам, химический состав каждого продукта должен быть описан на английском языке. Описание должно начинаться с ингредиента, который содержится в наибольшем количестве в продукте. Если продукт растительного происхождения, необходимо указать латинское ботаническое название растения [29]. Анализ веб-сайта показал, что дистрибьюторы масла сандалового дерева не предприняли необходимых усилий для правильного описания продукта.Полное описание, соответствующее рекомендациям INCI, появилось только на 45% польских и 14% немецких веб-сайтов. Возможно, в листовках, прилагаемых к продукту, указан полный состав в соответствии с руководящими принципами INCI, но дистрибьюторы, делая акцент на рекламе, не уделили должного внимания этому аспекту, что могло способствовать увеличению дезинформации на рынке ароматерапии как в Польше, так и за рубежом. .

При изучении различий в описании продуктов в зависимости от языка веб-сайта следует упомянуть исторические и культурные аспекты в польских, немецких и англоязычных странах.История развития ароматерапии в Польше короче, чем у наших западных соседей [30–32]. С годами ароматерапия в Польше и западных странах развивалась по-разному. Использование эфирных масел, которое сейчас называется ароматерапией, было введено в современную Европу французским химиком Рене Гаттефоссе в 1920 году из-за использования масла лаванды для заживления ран. В литературе этот метод был впервые описан этим исследователем в книге, опубликованной в 1937 году. Другой французский ученый, д-р.Жан Валне, книга которого была опубликована в 1964 году, отвечает за развитие ароматерапии в Германии. Эфирные масла также довольно рано приобрели популярность в Великобритании, где были колонии в Индии, на родине сандалового масла. Великобритания, благодаря заметному участию в экспорте, также способствовала распространению ароматерапии в США и Австралии [30, 33]. В Польше настоящее развитие ароматерапии было инициировано компанией Pollena-Aroma вместе с выпуском продукта попурри в 1989 году.Важнейшим событием ароматерапии в Польше стала публикация первого учебника на польском языке по использованию эфирных масел, Pachnąca Apteka – Tajemnice Aromaterapii , в 1992 году, через 55 лет после публикации Рене Гаттефоссе [31].

Примечательно, что медицина и натуральная косметика становятся все более популярными предметами для среднего потребителя [34], и эта популярность не всегда идет рука об руку с глубокими знаниями. Потребитель, покупающий продукт, называемый маслом сандалового дерева, не всегда имеет представление о том, что им могут манипулировать, и в то же время не имеет информации, которая позволяет ему или ей отличить подлинное эфирное масло от фальсифицированного.Например, незнание того, из каких растений следует получать масло сандалового дерева, создает риск неосознанного использования продуктов, которые не обладают свойствами, ожидаемыми потребителем, в то время как очень распространенный трюк продавцов эфирных масел заключается в продаже масла другого растения, кроме Санталовый альбом . В Польше ситуацию в этом плане можно считать скандальной. Каждое второе эфирное масло, продаваемое через польские веб-сайты под названием «масло сандалового дерева», на самом деле происходит от растения Amyris balsamifera , принадлежащего к семейству Rutaceae (цитрусовые).На немецких сайтах ситуация ненамного лучше; 30% сайтов предлагали масло одного и того же завода. Amyris balsamifera — небольшое дерево, растущее на Гаити и на Ямайке [2]. Хотя это растение называется по-польски вест-индийским сандалом, ботанически оно не имеет ничего общего с семейством сандаловых деревьев. Масло, полученное из растения Amyris balsamifera , отличается по химическому составу от масла сандалового дерева и, следовательно, по своему воздействию на организм. Масло из растения Amyris balsamifera стало очень популярной и менее дорогой альтернативой настоящему маслу сандалового дерева из-за его характерного древесного аромата, подобного аромату сандалового масла.Однако этот материал нельзя использовать в качестве заменителя сандалового масла в ароматерапии [2]. По мнению авторов, каждое масло из растения Amyris balsamifera должно продаваться под своим именем, например, как эфирное масло амириса. Информация об ароматных нотах и ​​возможном сходстве с маслом сандалового дерева может быть добавлена ​​только в качестве дополнительной информации. Английский рынок в этом отношении более честен: растение Amyris balsamifera фигурирует в описании только на одной странице на английском языке.Напротив, на английском рынке больше всего масел из других видов сандалового дерева по сравнению с рынками Германии и Польши: Santalum spicatum (10%), Santalum paniculatum (4%) и Santalum australedonicum (2%).

Santalum spicatum происходит в основном из юго-западной Австралии. Морфологически и физиологически сходен с Santalum album . В отличие от белого сандалового дерева, которое очень дорого, сандал из Австралии мог использоваться в значительно большем масштабе в девятнадцатом веке из-за его большого количества в естественной среде.Масло, полученное из Santalum spicatum , отличается от настоящего сандалового масла Santalum album , но большую популярность в парфюмерии и ароматерапии оно приобрело в конце ХХ века [24]. Эфирное масло из дерева Santalum spicatum по составу отличается от масла из Santalum album . Наиболее важным отличием является содержание α -санталола и β -санталола, которое в Santalum spicatum значительно ниже.Масло, полученное из S. spicatum , содержит несколько других веществ, которые увеличивают интенсивность аромата, в том числе фарнезол, который в следовых количествах присутствует в белом сандале [24]. Из-за различий в составе масло Santalum spicatum имеет несколько иное действие, чем масло Santalum album . Компонент E, E-фарнезол, который является уникальным для этого конкретного масла, дополнительно оказывает седативное действие и может уменьшить реакцию на психические раздражители, например, вызванные употреблением стимуляторов.Этот же ингредиент также усиливает действие других дезинфицирующих средств. Еще один ингредиент, которого нет в масле сандалового дерева, — это эпи-альфа-бисаболол, обладающий дополнительным противовоспалительным действием. Также было показано положительное влияние масла Santalum spicatum на предотвращение развития атеросклероза [24]. Масло австралийского сандалового дерева считается менее безопасным для использования, чем масло Santalum album , из-за высокого содержания фарнезола, который считается контактным аллергеном [13].Безопасность масла белого сандалового дерева была подтверждена исследованием, в котором только 0,1–2,4% респондентов проявили гиперчувствительность [7].

Santalum paniculatum является эндемиком только самого большого острова Гавайев, Большого острова. Это дерево — единственный гавайский вид сандалового дерева, который в настоящее время коммерчески разводится, но в очень ограниченных количествах. Масло гавайского сандалового дерева встречается редко и доступно лишь от случая к случаю; он характеризуется низким содержанием Z β -санталола и высоким содержанием α -сантала, E- β -санталола и спиросанталола [35].

Santalum austrocaledonicum менее важен в современной ароматерапии из-за мелкомасштабного производства эфирного масла. Этот вид сандалового дерева встречается только в Новой Каледонии и Республике Вануату [4]. Масло Santalum austrocaledonicum соответствовало содержанию α — и β -санталола, указанного стандартами ISO для сандалового масла, только на 19% исследованных деревьев с двух островов Республики Вануату [36].

Отличительной чертой английского интернет-рынка является относительно частые (24%) случаи растворения эфирных масел Santalum в растительных маслах в виде готового к употреблению продукта, которого нет на немецком рынке в все и редко встречаются на польском рынке.Такая смесь часто включает другие эфирные масла или ингредиенты, такие как витамин Е. Этот тип продукта обычно продается в больших упаковках в пластиковых бутылках различных цветов и форм, в то время как большинство эфирных масел обычно продается в 5, 10 и 15 мл. бутылки из темного стекла. Кроме того, состав таких смесей подробно описан, и их сложно спутать с эфирным маслом сандалового дерева из Santalum album , хотя на фото иногда появляется название «Эфирное масло сандалового дерева», чего не должно происходить.

Отдельная проблема — полное отсутствие ботанического названия масличного растения, как на фото продукта, так и в описании. Как правило, в этом отношении лидируют немецкие веб-сайты с плохим описанием (26% веб-сайтов), за ними следуют польские веб-сайты (18% веб-сайтов). Возможно, производители продают масло хорошего качества, но с некорректным описанием, но, учитывая общий взгляд на рынок сандалового масла и уровень нарушений, авторы не рекомендуют покупать сандаловое масло на таких сайтах, потому что нельзя сказать, что вы получите.

К сожалению, не всем сайтам, указавшим ботаническое название масличного растения Santalum album , можно доверять из-за цены продукта. Качественное масло сандалового дерева не может быть слишком дешевым. Santalum album долгое время был проявлением экономики грабежа и чрезмерной эксплуатации природных ресурсов. Наибольшее количество масла получают из растений старше 30 лет. На рынке наблюдался дефицит сандалового масла, что увеличивало его цену [2, 9, 10].Польские компании, продающие настоящее масло сандалового дерева, проверенное методом хроматографии, предлагали свой продукт по минимальной цене 21 злотый за 1 мл масла, а средняя цена масел, которые авторы считают маслом хорошего качества, составляла 28,19 злотых за 1 мл. В то же время на одном из вроде бы надежных польских сайтов с полным описанием, содержащим ботаническое название Santalum album , можно было купить сандаловое масло почти в десять раз дешевле, а именно по 2,64 злотых за 1 мл. Авторы сочли эту цену попыткой мошенничества и добавили ценовой критерий к выбору качественной продукции.При анализе цен на масла с вписанным ботаническим названием Santalum album вне зависимости от языка прослеживается их расслоение. Есть дорогие и недорогие продукты, и есть только несколько продуктов с промежуточной ценой, поэтому лимит в 21 злотый, принятый на польском рынке, также использовался на немецком и английском рынках. Средние цены на высококачественные масла на этих двух рынках составляли 45,35 злотых и 50,79 злотых за мл продукта соответственно. Несоответствие средней цены на качественную продукцию зависит от экономических условий в регионе, и анализ этого вопроса выходит за рамки данной статьи.Однако, чтобы наблюдать экономическое неравенство на описанных рынках, стоит указать среднюю годовую зарплату: Польша = 31 970 долларов США; Германия = 53 638 долларов США; США = 65 836 долларов США [37]. Возможно, годовая заработная плата влияет на процентную долю высококачественных масел сандалового дерева, доступных в Интернете, которая составляет 8% на польских сайтах, 32% на немецких сайтах и ​​38% на английских сайтах.

Вероятность покупки качественного сандалового масла на польских веб-сайтах также низка, потому что реальное масло не наблюдается до 10-й позиции на отображаемых страницах в Google, и трудно представить, что средний покупатель посетит 10 страниц в поиске. масла сандалового дерева! Рынки Германии и Англии в этом отношении заметно лучше, и высококачественные сандаловые масла можно найти на первых трех веб-сайтах.

Авторам известно о нескольких ограничениях данного исследования и факторах, которые могли повлиять на результаты.

Существенным фактором, определяющим результаты работы, является критерий качества масла сандалового дерева: наличие ботанического названия Santalum album на изображении продукта и / или на сайте и цена товара не менее 21 злотого за мл. . В обоих случаях результаты могли быть искажены. Некоторые масла без указанного ботанического названия могли на самом деле происходить из Santalum album , но дистрибьютор не приложил усилий, чтобы правильно описать продукт.Минимальный предел 21 злотый / мл был обязательным на основании предварительных знаний о сандаловом масле на польском рынке и формирования цен, но, возможно, правильно описанное масло по цене 17 злотых / мл также окажется хорошего качества после хроматографического исследования. . Для рынков Германии и Англии могут возникнуть проблемы иного типа; порог в 21 злотый мог быть слишком низким, а хорошие продукты могли считаться низкокачественными. Также существует проблема преднамеренной фальсификации масла, когда продавцы добавляют менее дорогое кедровое масло, но оставляют надежную цену и ботаническое название Santalum album [38].

Еще один важный вопрос — это метод поиска по сайту. Авторы постарались сделать этот процесс максимально объективным, например, изменив местоположение при смене языка поиска. Однако рабочие алгоритмы поиска Google означают, что история поиска влияет на последующие поиски; например, порядок страниц может быть связан с предыдущими поисками различных косметических продуктов. Если разные люди выполняют одинаковый поиск на разных компьютерах, это также может привести к разным результатам.

Самый надежный метод оценки качества сандалового масла — хроматография. Учитывая стоимость проведения такого исследования, авторам и онлайн-покупателям приходилось полагаться только на информацию от продавцов и свои собственные знания. Несмотря на ограниченность этой работы и возможные неточности в классификации масел как хороших или сомнительных, полученные наблюдения указывают на серьезные недостатки в продаже сандалового масла через Интернет, причем наихудшие результаты были получены на польских веб-сайтах, что убедило авторов опубликовать результаты, достижения.

В Польше масло сандалового дерева играет важную роль в парфюмерии, где важны его ароматические качества [32]. Можно предположить, что для некоторых потребителей эфирные масла должны выполнять только ароматическую функцию, а другие ароматерапевтические свойства не так важны. Тем не менее, было бы правильнее описать продукт так, чтобы потенциальный покупатель, даже не зная ботанического названия масличного растения, знал, покупает ли он продукт хорошего качества или менее дорогую альтернативу. только с аналогичными ароматическими качествами.Люди, которые покупают масло сандалового дерева для косметических или ароматерапевтических процедур, должны быть особенно осторожны при покупке в Интернете и ни при каких обстоятельствах не должны руководствоваться низкой ценой.

6. Выводы

Масла сандалового дерева хорошего качества, полученные из растения Santalum album , по цене, равной или превышающей стоимость продуктов, прошедших хроматографическое тестирование, составили незначительный процент продуктов, продаваемых через Интернет. Не зная ботанического названия эфиромасличного растения и ценового диапазона натурального масла сандалового дерева, вероятность покупки надежного продукта мала на всех проанализированных веб-сайтах, с самой низкой вероятностью, наблюдаемой на польских сайтах.

Доступность данных

Данные, используемые в этой статье, доступны по запросу от первого автора.

Раскрытие информации

Это исследование было проведено в рамках работы авторов в Силезском медицинском университете, Катовице, Польша.

Конфликт интересов

У авторов нет конфликта интересов, связанного с данным исследованием.

Рассматривали ли вы масло сандалового дерева для повседневного ухода за кожей?

Некоторые эфирные масла творит чудеса с кожей.Они натуральные, легкодоступные и простые в использовании. Среди них масло сандалового дерева. Во всем мире это масло стало очень популярным из-за его полезных свойств для ухода за кожей. У него потрясающий аромат, поэтому его также используют в парфюмерии. Кроме того, считается, что сандал обладает некоторыми лечебными свойствами. Когда дело доходит до кожи, масло является очень предпочтительным, потому что оно обладает противовоспалительным, антимикробным, противоугревым и противовоспалительным действием. Поскольку салоны закрыты на карантин, это масло может стать вашим незаменимым ингредиентом для быстрого ухода за кожей.

ТАКЖЕ ЧИТАЙТЕ | Сделайте свою кожу красивой с помощью этих поделок из помидоров

Вот все, что вам нужно знать.

* Если вы страдаете от прыщей, сандаловое масло может стать вашим лекарством. Нанесите немного масла на пораженный участок чистыми пальцами и дайте ему остаться. Он не имеет абсолютно никаких побочных эффектов, но имейте в виду, что вы не применяете его чрезмерно. Это может закупорить поры на коже.

* Некоторые люди загорают быстрее, особенно в летние месяцы.Если вы один из них, подумайте о масле сандалового дерева для улучшения цвета кожи. Удаляет загар, пигментные пятна и осветляет кожу.

* Как упоминалось ранее, масло обладает противовоспалительными свойствами. Он может бороться с воспалением кожи. Говорят, что масло содержит определенные ферменты, которые, помимо защиты кожи от преждевременного старения, могут предотвратить окислительный стресс и излечить поврежденные ткани.

ТАКЖЕ ЧИТАЙТЕ | Выполняйте эти 3 простых действия каждое утро для сияющей кожи

* Для того, чтобы ваша кожа была здоровой, вы также должны спать в течение достаточного количества часов.Сон может дать вашей коже столь необходимый отдых, открыть закупоренные поры, а также расслабить вас. Это, в свою очередь, придаст вашему лицу естественное сияние. В конце концов, прекрасный сон — это настоящая вещь. А чтобы спать спокойно, можно использовать сандаловое масло. Аромат масла снимает стресс и беспокойство и способствует хорошему ночному отдыху. Все, что вам нужно сделать, это добавить его в свой ночной уход за кожей и погрузиться в глубокий и столь необходимый сон.

границ | Масло восточно-индийского сандалового дерева — ингибитор фосфодиэстеразы: новый метод лечения воспалительного заболевания кожи

Введение

Псориаз (PS) и атопический дерматит (AD) — это хронические или рецидивирующие воспалительные дерматологические заболевания, которые существенно влияют на качество жизни миллионов пациентов и требуют больших затрат ресурсов здравоохранения во всем мире (Carroll et al., 2005; Mancini et al., 2008; Аркрайт и др., 2013; Parisi et al., 2013). ПС и БА — четко отделимые расстройства, при этом БА обычно проявляется в раннем детстве, а ПС — в позднем подростковом и раннем взрослом возрасте (Guttman-Yassky et al., 2011; Czarnowicki et al., 2014; Noda et al., 2015; Chiricozzi et al., др., 2016). Однако многочисленные экологические и генетические факторы способствуют возникновению этих цитокин-опосредованных хронических состояний кожи, и трудно дифференцировать PS и AD во время острой эритродермической фазы, поскольку оба они вызваны аберрантной выработкой воспалительных цитокинов / хемокинов кератиноцитами и врожденным и адаптивным иммунитетом. популяции клеток (Schafer, 2012).Неудивительно, что методы лечения, нацеленные на сигнальные пути воспалительных цитокинов / хемокинов, обеспечивают симптоматическую пользу пациентам с ПС и БА (Gittler et al., 2012; Lowes et al., 2014).

Существующие местные и системные препараты для лечения этих расстройств не всегда эффективны и создают риск побочных эффектов, требующих периодического использования и тщательного наблюдения (Hsu and Armstrong, 2014). Определение местных противовоспалительных агентов, которые могут аннулировать симптомы, было бы полезно для лечения хронических воспалительных заболеваний кожи.Натуральные продукты остаются лучшим источником для разработки новых методов лечения из-за их структурного разнообразия и не соответствуют ни одному источнику малых молекул (Newman and Cragg, 2012). Широко используемое в ароматерапии эфирное масло индийского сандалового дерева Santalaceae , широко известное как масло восточно-индийского сандалового дерева (EISO), является мощным противовоспалительным, антисептическим и вяжущим средством (Burdock and Carabin, 2008). ; Sharma et al., 2014; Bommareddy et al., 2017), свойства идеальны для лечения воспалительных заболеваний кожи, как сообщалось при псориазе (Sharma et al., 2017) и акне (Moy et al., 2012).

Циклический аденозинмонофосфат (цАМФ) является важным регулятором иммунных и воспалительных реакций, а обмен внутриклеточных циклических нуклеотидов зависит от активности фосфодиэстераз (ФДЭ) (Oldenburger et al., 2012). Уровни изоферментов PDE регулируются различными стимулами, включая индуцированную простагландином E2 экспрессию PDE3B, 4A4, 4A1, 4D2 и 4D3 в Т-лимфоцитах человека (Seybold et al., 1998) и индуцированная toll-подобным рецептором 4 (TLR4) экспрессия PDE4B2 в моноцитах человека (Elwood et al., 2010). Из одиннадцати семейств PDE (PSE1-11) PDE4 является основным классом цАМФ-специфичных ферментов. Он состоит из четырех генов (PDE4A-D), каждый из которых имеет несколько вариантов, кодирующих более двадцати белковых продуктов (Wittmann and Helliwell, 2013; Blanchard et al., 2014). PDE4 являются преобладающими изоферментами, разлагающими цАМФ, в гемопоэтических клетках (Bjorgo and Tasken, 2006). В дополнение к их действию на иммунные клетки изоформы PDE4 являются модуляторами провоспалительных стрессовых реакций в легочных эпителиальных клетках (Seybold et al., 1998; Wright et al., 1998), эндотелий сосудов, кератиноциты, гладкие мышцы, суставные хондроциты, синовиоциты (Houslay et al., 2005; Schett et al., 2010) и отдельные аспекты центральной нервной системы (Ashrafian et al., 2010; Мартинес и Гил, 2014). Терапевтический потенциал ингибирования PDE4 при таких заболеваниях, как хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), кистозный фиброз (CF) и астма, давно оценен, при этом повышенная регуляция PDE4B в эпителиальных клетках дыхательных путей участвует в патогенезе ХОБЛ (Michalski et al., 2012).

Повышенные уровни внутриклеточного цАМФ активируют цАМФ-зависимую протеинкиназу (PKA), которая, в свою очередь, активирует определенные факторы транскрипции, такие как белок, связывающий элемент цАМФ-ответа (CREB), но ингибирует другие, такие как ядерный фактор каппа B (NF-κB) (Маккензи и Хауслей, 2000). PKA, по-видимому, не ингибирует транскрипцию, управляемую NF-κB, нарушая деградацию IkBα или активность связывания ДНК NF-κB (Takahashi et al., 2002). Скорее, транскрипционная активность NF-κB может подавляться либо напрямую, через фосфорилирование субъединицы NF-κB, p65, по серину 536 С-концевого домена трансактивации (p-p65) (Takahashi et al., 2002) и блокируя ядерную транслокацию p65 (Abdollahi et al., 2011) или косвенно, через фосфорилирование и конкуренцию за транскрипционный коактиватор CREB-связывающий белок (CBP) или его гомолог, p300 (Parry and Mackman, 1997).

Фосфодиэстеразы активируются и активируются при PS и AD и участвуют в качестве ключевых индукторов этих и других воспалительных заболеваний (Smith et al., 2004; Schafer, 2012; Schafer et al., 2014). Аберрантная экспрессия и активация PDE4 в кератиноцитах и ​​инфильтрированных лейкоцитах могут способствовать PS, AD и другим состояниям (Schafer et al., 2014) через иммуноопосредованные воспалительные процессы (Oger et al., 2005). В то время как активация TLR и продукция простагландинов могут направлять повышенную экспрессию PDE, особенно PDE4 (Schafer et al., 2014), а EISO может подавлять опосредованную липополисахаридами (LPS) активность циклооксигеназы и экспрессию цитокинов / хемокинов (Sharma et al., 2014). ), может ли EISO также блокировать LPS-индуцированные стрессовые реакции, такие как активация PDE, неизвестно. В этом отчете мы проверяем гипотезу о том, что EISO может подавлять эти провоспалительные реакции посредством ингибирования расщепляющих цАМФ PDE и последующего стимулирования опосредованной цАМФ активации NF-κB.Мы демонстрируем, что EISO может облегчить симптомы у педиатрических пациентов с AD и что EISO может подавлять хронические воспалительные псориатические состояния кожи путем подавления экспрессии PDE4 и 7, а также общей активации PDE и NF-κB на моделях рака кожи, крови и легких. Эти результаты предполагают, что EISO может быть новым терапевтическим средством для лечения хронических и острых воспалительных заболеваний, таких как PS и AD, и других воспалительных заболеваний.

Материалы и методы

Фаза 2 клинических испытаний лечения болезни Альцгеймера / экземы

Одноцентровое открытое испытание фазы 2, подтверждающее правильность концепции, по схеме трех составов EISO для местного применения, содержащих 0.Использовалась 1% коллоидная овсянка для лечения AD / экземы (Browning et al., 2017). Западный институциональный обзорный совет (WIRB) рассмотрел и утвердил протокол и документы об информированном согласии / согласии до начала исследования (номер исследования WIRB 20140941). Все пациенты и / или законные представители предоставили письменное информированное согласие / согласие, в зависимости от обстоятельств, до проведения любых мероприятий, связанных с исследованием (номер исследования WIRB — 1146975). Участники испытания использовали комбинацию геля для ванн с пеной, успокаивающего крема и ежедневного очищающего средства в течение 60 дней.Двадцать пять пациентов с легкой, умеренной или тяжелой экземой были включены в исследование, и 22 пациента завершили курс лечения. Пациентов оценивали на предмет изменений в степени тяжести заболевания с использованием изменений в баллах по их площади экземы и индексу тяжести (EASI), как описано у Hanifin et al. (2001) и Leshem et al. (2015).

Культура клеток

Первичные культуры дермальных фибробластов человека (DF), иммортализованных эпителиальных клеток бронхов человека с помощью BEAS-2B и клеток A549 (линия альвеолярных эпителиоподобных клеток типа II, полученная из аденокарциномы легких) поддерживали в DMEM с добавлением 5% (v / v) FBS (Invitrogen, Карлсбад, Калифорния, США).Клетки острого моноцитарного лейкоза человека THP-1 поддерживали в RPMI (Invitrogen) / 5% (об. / Об.) FBS. Все культуры поддерживали при 37 ° C, 5% CO ₂ атмосфере.

Экспериментальный состав EISO

EISO фармацевтического качества (лот: PISO-110904SD / SA) был получен от Santalis Pharmaceuticals, Inc. (Сан-Антонио, Техас, США). Ранее сообщалось об анализе компонентов и его соответствии международному стандарту для индийского масла сандалового дерева (ISO 3518: 2002) (Sharma et al., 2017). EISO разбавляли диметилсульфоксидом (ДМСО) в виде 10% (об. / Об.) Исходного раствора. Эквивалентные объемы ДМСО, использованные в качестве контролей носителя, не оказали неблагоприятного воздействия на клетки.

Модель полной толщины кожи человека

Восстановленные модели органоидов нормальной кожи человека на полную толщину и псориатического фенотипа (MatTek Corp., Ашленд, Массачусетс, США) инкубировали в аналитических средах производителя (Grossman et al., 1989; Nograles et al., 2008) с добавлением или без EISO при 0,001 или 0.002% (об. / Об.). Среды с добавками или без них меняли через день. На четвертый день были собраны образцы для гистологического и иммуногистохимического (ИГХ) анализа.

Антитела и реагенты

Моноклональное антитело NF-κB p-p65 (93h2) было от Cell Signaling Tech (Данверс, Массачусетс, США), а поликлональное антитело PDE4 (ab14628) было от Abcam (Кембридж, Соединенное Королевство). Набор для анализа циклических нуклеотидов ФДЭ BIOMOL был от ENZO Life Sciences, Inc. (Фармингдейл, Нью-Йорк, США).LPS ( Escherichia coli 0111: B4) и 3-изобутил-1-метилксантин (IBMX) были от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США), а ролипрам был подарком от MedChem Express (Monmouth Junction, NJ. , Соединенные Штаты).

Иммуногистохимическое окрашивание восстановленных моделей псориаза и нормальной ткани проводили с использованием депарафинизированных срезов, подвергнутых поиску антигена, с последующей инкубацией с первичным антителом против PDE4 (1: 100). Связанное антитело выявляли окрашиванием DAB с использованием универсального вторичного антитела Ventana (Ventana Medical System, Тоскана, Аризона, США).Все окрашенные слайды были отображены в цифровом виде при увеличении, эквивалентном 20-кратному. Случайные поля оценивались независимым патологом.

Активность цАМФ ФДЭ

Общую активность цАМФ PDE определяли из лизатов клеток DF, BEAS-2B, A549 и THP-1 через 2 и 4 ч после стимуляции LPS (1 мкг / мл) и EISO (0,001–0,002%) или IBMX. или ролипрам [10 мкМ; ранее было продемонстрировано насыщение концентраций для ингибирования PDE (Cox et al., 1999; Oger et al., 2005)]. Активность ФДЭ оценивали с помощью колориметрического анализа циклической нуклеотидной фосфодиэстеразы (Enzo Life Sciences) в соответствии с протоколом производителя и выражали в виде пмоль фосфата, генерируемого в минуту относительно активности поставляемого препарата ФДЭ головного мозга крупного рогатого скота, стандартизованного по общему содержанию белка лизата клеток, определенному с помощью прибора Pierce. Набор для анализа белка BCA (Thermo Fisher Scientific, Сан-Хосе, Калифорния, США).

In vitro активность PDE оценивали путем модификации набора для анализа циклических нуклеотидов PDE от Enzo Life Sciences. Вкратце, EISO (0,001–0,002%) добавляли к препарату ФДЭ головного мозга крупного рогатого скота (20 мЕд; 1 единица = гидролиз 1 нМ цАМФ в минуту при 30 ° C, pH 7,4) и инкубировали в присутствии буфера для анализа цАМФ, и 5′-нуклеотидаза в течение 30 мин при комнатной температуре. Реакцию останавливали добавлением реагента BIOMOL Green и полученного Abs. OD _{, 620,} нм выражали как ферментативную активность относительно стандартной кривой для препарата ФДЭ бычьего мозга.

Иммунофлуоресценция

Клетки выращивали на покровных стеклах в течение ночи, фиксировали в 4% (мас. / Об.) Параформальдегиде, забуференном PBS, и повышали проницаемость в 0,1% физиологическом растворе с фосфатным буфером Triton X-100 (Bio-Rad). Затем клетки инкубировали с первичным p-p65 (1: 200) и визуализировали с помощью козьего вторичного антитела против кроличьего IgG Alexa Fluor 488 (1: 1000 Thermo Fisher Scientific; A-11008) и окрашивали фаллоидином, конъюгированным с родамином (1: 500). , Thermo Fisher Scientific; R415). Покровные стекла помещали на предметные стекла с использованием среды для монтажа DAPI (Vector Laboratories, Inc., Бурлингейм, Калифорния, США; H-1200) и отображены как отдельные конфокальные плоскости средних ячеек с помощью объектива 40 × на конфокальном микроскопе LSM 780 (Carl Zeiss, Канада).

Иммуноферментные анализы (ELISA)

Сэндвич-твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) для TNF-α, MCP-1, IL-6 и IL-8, CXCL5 (Ray Biotech, Inc., Norcross, GA, США) проводили на культуральных средах от LPS стимулировал клетки DF, BEAS-2B, A549 и THP-1 (с обработкой EISO и без нее) в соответствии с инструкциями производителя.ELISA для p-p65 и общего p65 (RayBiotech, Inc .; PEL-NF-κB P65 S536) выполняли с использованием клеточных лизатов из клеток DF, BEAS-2B, A549 и THP-1 ± LPS / EISO в условиях, указанных в фигура легенда. Стандартные кривые были построены с использованием поставляемых стандартов, чтобы позволить преобразовать показания Abs OD ₄₅₀ нм экспериментальных образцов в пг / мл соответствующих факторов.

Количественная ПЦР в реальном времени (qRT-PCR) для экспрессии мРНК изоформ PDE

выделяли из клеток DF, BEAS-2B, A549 и THP-1 с использованием набора RNeasy (QIAGEN, MD, США) в соответствии с протоколом производителя.кДНК синтезировали с использованием системы синтеза Super Script First-Strand для ОТ-ПЦР (Invitrogen). PDE4A, PDE4B, PDE4C, PDE4D, PDE7A и PDE7B амплифицировали с использованием системы ПЦР в реальном времени ABI-PRISM 7900 (Applied Biosystems, Фостер-Сити, Калифорния, США). Праймеры были сконструированы следующим образом: PDE4A прямой, 5′-GCTGAAGACCTCATCGTAAC-3 ‘; обратный, 5’-ATTCTGTTTGTCCAGGAATG-3 ‘; PDE4B вперед, 5’-ATTCTGTTTGTCCAGGAATG-3 ‘; обратный, 5’-ATGCTGGTGTAGAAAGGAGA-3 ‘; PDE4C, вперед, 5’-AGAGTGGTACCAGAGCAAGA-3 ‘; и наоборот, 5’-TGGGAGCCACCTATAACTAA-3 ‘.PDE4D вперед, 5’-CACCAAATGACCTTACCTGT-3 ‘; обратный, 5’-AGCTCCACTGTTACCTTTCA-3 ‘; PDE7A, 5’-GCAATATGAATTTGGCTTTC-3 ‘; обратный, 5’-GGAAAGAGCTGCAGTCTAAA-3 ‘; PDE7B вперед, 5’-TCTTCAATACCCATGGACTC-3 ‘; обратный, 5’-ATCCTGTGTCATTTCCTTTG-3 ‘; 18S РНК вперед, 5’-CGATGCTCTTAGCTGAGTGT-3 ‘; обратный, 5’-GGTCCAAGAATTTCACCTCT-3 ‘. Экспрессию целевого гена нормализовали до уровней мРНК 18S в соответствующих образцах в качестве внутреннего стандарта, и относительное количество транскриптов рассчитывали с использованием метода ΔΔCt от Applied Biosystems, как описано ранее (Becker-Santos et al., 2012).

Статистический анализ

, результаты qRT-PCR и ELISA сравнивали с использованием одностороннего дисперсионного анализа (ANOVA) с последующим пост-тестом Бонферрони, сравнивая только интересующие пары, если значения ANOVA p были значимыми. Результаты пост-теста показаны как ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0,001 по сравнению с обработанными носителем и фермент-отрицательными контролями PDE; ^† p <0.05, ^†† p <0,01, ^††† p <0,001 по сравнению с контролями, стимулированными только LPS и фермент-положительными ферментами PDE.

Результаты

Фаза 2 клинических испытаний EISO для лечения AD

Двадцать пять педиатрических пациентов с легкой, умеренной или тяжелой формой БА лечились по схеме, содержащей EISO, в течение 8-недельного курса и оценивались на предмет изменений тяжести их заболевания с использованием метода подсчета баллов EASI (рис. 1A). Все пациенты, кроме одного (у которых была аллергическая реакция на раствор для чистки ковров до их последнего посещения), показали улучшение своего состояния.87,5% пациентов достигли основной конечной точки исследования (снижение их оценки EASI на 25%), и не было никаких побочных эффектов или проблем с безопасностью лечения. Среднее снижение общих баллов составило 67,8% (в среднем на 6,2 балла EASI на пациента), при этом 75% пациентов достигли снижения своей оценки более чем на 50%. 18,8% испытали полную ремиссию своих симптомов (снижение на 100% по шкале EASI). Типичный пациент показан до и после лечения (рис. 1B).

РИСУНОК 1. Фаза 2 клинических испытаний лечения атопического дерматита (АД) и псориаза. (A) Процентное изменение баллов EASI пациентов за 8 недель (ранжированные, n = 32). (B) Типичный пациент с тяжелой формой болезни Альцгеймера (экзема) до (слева) и после (справа) 8 недель лечения режимом, содержащим восточно-индийское масло сандалового дерева (EISO). «Письменное информированное согласие было получено от человека на публикацию этого изображения».

EISO подавляет LPS-индуцированную активность PDE

Клинические ответы на лечение AD EISO и связи между AD и PDE, описанные выше, вынудили нас изучить, может ли EISO влиять на клеточную активность PDE в панели типов клеток.DF использовался в качестве установленных моделей LPS-стимулированных воспалительных реакций, которые можно подавить обработкой EISO (Sharma et al., 2014). Клетки THP-1 использовали для моделирования инфильтрированных лейкоцитов (Schafer et al., 2014). Клетки BEAS-2B использовали для моделирования повышенной экспрессии PDE4B в эпителиальных клетках дыхательных путей как фактора, способствующего патогенному воспалительному ответу ХОБЛ (Michalski et al., 2012; Blanchard et al., 2014). Клетки A549 использовались в качестве модели рака легких, поскольку рак легких является частым сопутствующим заболеванием при ХОБЛ и, следовательно, имеет общие патогенные пути (Adcock et al., 2011; Yang et al., 2011), включая терапевтический потенциал нацеливания PDE4 (Pullamsetti et al., 2013).

Общую активность цАМФ PDE определяли из клеточных лизатов через 2 и 4 часа после стимуляции LPS ± EISO (рис. 2). Активность PDE в DF увеличивалась в ~ 2,5 раза после воздействия LPS, в то время как совместное лечение с EISO подавляло LPS-опосредованную активность PDE в зависимости от дозы и времени и до уровней, сравнимых с наблюдаемыми в контрольном образце при 0,002% (рис. 2A. ). В то время как ЛПС незначительно увеличивал активность ФДЭ в клетках BEAS-2B (до 1.В 7 раз через 4 часа), EISO подавлял LPS-опосредованную активность PDE на 0,001% и ниже базальных уровней контрольных образцов на 0,002% (рис. 2B). Активность PDE в LPS-стимулированных клетках A549 также была умеренно увеличена (~ 1,6 раза за 4 часа), а обработка EISO подавляла LPS-опосредованную активность PDE по крайней мере в два раза и до уровней до трети от базального уровня, наблюдаемого в контроле. образцы (рисунок 2C). Активность PDE в клетках THP-1 увеличивалась примерно в два раза после воздействия LPS, а лечение EISO в зависимости от дозы и времени подавляло LPS-опосредованную активность PDE до уровней, неотличимых от уровня контрольного образца при 0.002% EISO (Рисунок 2D). Эти наблюдения предполагают, что EISO может противодействовать как индуцированной, так и хронической активности PDE в спектре типов клеток.

РИСУНОК 2. Масло сандалового дерева восточной Индии подавляет индуцированную липополисахаридами (LPS) активность фосфодиэстеразы (PDE) в клеточных моделях. (A) дермальный фибробласт (DF), (B) BEAS-2B, (C) A549 и (D) THP-1 клетки обрабатывали носителем (0), LPS (1 мкг / мл) или LPS + EISO при 0.001 или 0,002% (об. / Об.) В течение 2 часов (белые столбцы) и 4 часа (черные столбцы). Активность циклического аденозинмонофосфата (цАМФ) PDE определяли из клеточных лизатов, как описано в разделе «Материалы и методы». Все значения даны как среднее ± стандартная ошибка среднего ( n = 4). ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0,001 по сравнению с нестимулированным контролем; ^† p <0,05, ^†† p <0,01, ^††† p <0.001 по сравнению с клетками, стимулированными ЛПС.

Фармакологическая характеристика ингибирования ФДЭ с помощью EISO

Фосфодиэстеразы указаны как индукторы воспалительных расстройств PS и AD (Smith et al., 2004; Schafer, 2012; Schafer et al., 2014), причем PDE4 специфически идентифицирован как индуцированный в кератиноцитах и ​​инфильтрированных лейкоцитах PS и поражениях AD. (Oger et al., 2005; Schafer et al., 2014). Чтобы оценить вклад PDE4 в EISO-ослабление LPS-стимулированной активности общего клеточного гидролиза цАМФ, подавление общей клеточной активности цАМФ PDE в обработанных EISO, LPS-стимулированных лизатах клеток THP-1 сравнивали с таковой для клеток, обработанных IBMX. как неспецифический ингибитор ФДЭ или ролипрам как селективный ингибитор ФДЭ4 (рис. 3А).IBMX и ролипрам подавляли гидролитическую активность цАМФ до уровней, сравнимых с уровнем контроля и лизатов, обработанных EISO, при этом неспецифический ингибитор PDE был на ~ 20% более эффективным.

РИСУНОК 3. Фармакологическая характеристика активности цАМФ-ФДЭ в ЛПС-индуцированных клетках ТНР-1. (A) Клетки THP-1 обрабатывали носителем (0), LPS (1 мкг / мл) или LPS + EISO (0,001 или 0,002%) или LPS + IBMX (10 мкМ) или LPS + ролипрам (10 мкМ). за 4 ч. Активность c-AMP PDE определяли в клеточном лизате, как описано в разделе «Материалы и методы».Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 4). ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0,001 по сравнению с нестимулированным контролем; ^† p <0,05, ^†† p <0,01, ^††† p <0,001 по сравнению с клетками, стимулированными LPS. (B) Способность EISO непосредственно ингибировать PDE была оценена in vitro путем модификации набора для анализа циклической нуклеотидной фосфодиэстеразы, как описано в разделе «Материалы и методы», в контроле носителя (0), только PDE мозга крупного рогатого скота (20 мЕд). , или + IBMX (10 мкМ), EISO (0.002%) или IBMX + EISO. Данные представлены как среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 3). ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0,001 по сравнению с отсутствием контроля PDE; ^† p <0,05, ^†† p <0,01, ^††† p <0,001 по сравнению с одним PDE.

Способность EISO имитировать ингибирование PDE IBMX и ролипрамом в LPS-стимулированных лизатах предполагает, что EISO может непосредственно ингибировать активность PDE.Поэтому мы оценили, может ли EISO подавлять активность гидролиза цАМФ ФДЭ головного мозга крупного рогатого скота (рис. 3В). 20 мЕд (мЕ) этого препарата PDE приводили к гидролизу цАМФ в 25 раз большему, чем у контрольного буферного раствора. IBMX и EISO подавляли эту активность примерно на 50%, а комбинация EISO и IBMX лишь незначительно дополнительно подавляла активность PDE. Эти результаты параллельны влиянию EISO и IBMX на активность гидролиза лизата цАМФ, показанному на рисунках 2, 3A, и предполагают, что EISO может эффективно противодействовать сильной острой активации PDE с помощью LPS и напрямую ингибировать активность PDE до уровней, сопоставимых с уровнем широкого спектра. и PDE4-селективный ингибитор PDE.

Влияние EISO на LPS-индуцированную транскрипцию изоформы PDE

Поскольку известно, что PDEs транскрипционно активируются различными провоспалительными стрессами (Smith et al., 2004; Oger et al., 2005; Schafer et al., 2014), способность EISO модулировать LPS-стимулированную экспрессию PDE, гидролизующие основной цАМФ, оценивали в DF путем измерения экспрессии PDE4A-D, 7A и 7B с помощью qRT-PCR (рис. 4). Стимуляция LPS приводила к 25-кратному увеличению экспрессии про-PDE4A-D и к 20- и шестикратному увеличению про-PDE7A и B, соответственно.EISO существенно ингибировал экспрессию LPS-индуцированного про-PDE4A, B и D и 7B, так что при 0,002% уровни транскриптов были на уровне или ниже базовых уровней. Кроме того, уровни про-PDE7A подавлялись примерно в три раза по сравнению с базовыми уровнями при 0,002% EISO. Хотя экспрессия про-PDE4C снижалась на ≤25% при лечении EISO, в целом эти результаты показывают, что EISO может подавлять как экспрессию, так и активацию основных ферментов гидролазы цАМФ в ответ на острую стимуляцию LPS.

РИСУНОК 4. Масло восточно-индийского сандалового дерева подавляет экспрессию цАМФ, гидролизующего изоформы PDE 4. DF обрабатывали контрольным носителем (0), LPS (1 мкг / мл) или LPS + EISO (0,001 или 0,002%) в течение 4 часов. Экспрессия мРНК изоформ PDE: (A) PDE4A, (B) PDE4 B, (C) PDE4C, (D) PDE4D, (E) PDE7A и (F) PDE7B, были проанализированы с помощью qRT-PCR. Относительные уровни экспрессии из репрезентативных экспериментов, повторенных трижды с аналогичными результатами, были нормализованы до уровня 18S рРНК.Все значения даны как среднее ± стандартная ошибка среднего ( n = 4). ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0,001 по сравнению с контролем; ^† p <0,05, ^†† p <0,01, ^††† p <0,001 по сравнению с клетками, стимулированными LPS.

EISO подавляет экспрессию PDE4 в восстановленном псориатическом органоиде кожи человека

Ранее мы сообщали, что EISO может вернуть псориатический фенотип восстановленной органотипической модели псориатической кожи (Sharma et al., 2017). Поскольку известно, что экспрессия PDE4 активируется в гиперпластическом эпидермисе кожи (Morizane and Gallo, 2012), мы также оценили экспрессию и распределение PDE4 на этой модели псориаза (Рисунок 5). После 4 дней культивирования на модели нормальной кожи наблюдались определенные слои кератиноцитов с экспрессией PDE4, локализованной преимущественно в виде светлого окрашивания базального слоя (рис. 5А), в то время как модель псориатической кожи демонстрировала утолщенный базальный слой слоя с гребнями Рете и повышенную экспрессию PDE4 в неорганизованный шиповатый слой и слои гранулезной оболочки (рис. 5В).При обработке EISO в течение 4 дней модель псориатической кожи демонстрировала четко определенные слои эпидермиса, причем экспрессия PDE4 преимущественно локализовалась в базальном слое и подавлялась до уровней ниже наблюдаемых в модели нормальной кожи (рис. 5C). Эти результаты показывают, что приведенные выше клинические наблюдения могут быть повторены в анализе кожи ex vivo и коррелируют восстановление нормального фенотипа кожи с помощью EISO с его способностью подавлять экспрессию PDE4.

РИСУНОК 5. Масло восточно-индийского сандалового дерева изменяет экспрессию и клеточное распределение PDE4. (A) Восстановленная нормальная кожа и (B) псориатическая кожа после 4 дней культивирования, или (C) псориатическая кожа после 4 дней культивирования + EISO (0,002%). Иммуногистохимия (ИГХ) экспрессии PDE4 в поперечных срезах кожных органоидов, как описано в разделе «Материалы и методы», была визуализирована и показывает эпидермальный слой: роговой слой (Sc), зернистый слой (Sg), шиповатый слой (Ss) и слой basalis (Sb) с подлежащей дермой и гребнями Рете.

EISO подавляет индуцированную LPS продукцию TNF-α, MCP-1, IL-6 и IL-8

Поскольку активация PDE связана с провоспалительными ответами, противовоспалительные свойства EISO оценивали по индуцированной LPS секреции ключевых цитокиновых / связанных с хемокинами факторов (TNF-α, MCP-1, IL-6 и IL-8) в клетки кожи (DF), легких (BEAS-2B и A549) и моноцитарные (THP-1) клетки (рис. 6). Используя ранее установленные условия для индукции этих цитокинов / хемокинов в DF и кератиноцитах с помощью LPS (Sharma et al., 2014, 2017), мы наблюдали, что кондиционированные среды содержали существенно повышенные уровни всех четырех факторов в этих четырех клеточных линиях, и что накопление хемокинов / цитокинов дозозависимо подавлялось EISO до почти 90%. Устойчивое подавление продукции ключевых факторов, связанных с цитокинами, указывает на то, что способность EISO подавлять продукцию провоспалительных цитокинов / хемокинов сохраняется во множестве типов клеток.

РИСУНОК 6. Липополисахарид стимулирует, а EISO подавляет выработку сигнальных цитокинов / хемокинов клетками DF (открытая полоса), BEAS-2B (закрашенная полоса), A549 (заштрихованная полоса) и THP-1 (двойная заштрихованная полоса).Клетки обрабатывали носителем (0), LPS (1 мкг / мл) или LPS + EISO (0,001 или 0,002%). Накопление TNF-α; 4 часа (A) , MCP-1 (B) , IL-8 (C) и IL-6 (D) через 24 часа определяли в кондиционированной среде с помощью ELISA. Накопление цитокинов / хемокинов сравнивали с уровнями в LPS-стимулированных образцах, выраженными в пг / мл. Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 4). ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0.001 по сравнению с контролем; ^† p <0,05, ^†† p <0,01, ^††† p <0,001 по сравнению с клетками, стимулированными LPS.

EISO подавляет LPS-стимулированную активацию NF-κB

TNF-α, MCP-1, IL-6 и IL-8 являются хорошо охарактеризованными мишенями транскрипции NF-κB (Tang et al., 2017). Поэтому мы оценили влияние лечения EISO на активацию NF-κB путем измерения уровней p-p65 в LPS-стимулированных клетках DF, BEAS-2B, A549 и THP-1.Используя анализ ELISA, все четыре клеточные линии показали устойчивую активацию NF-κB через 48 часов, в то время как совместная обработка с EISO подавляла LPS-опосредованную активацию NF-κB до 90% в клетках DF до нестимулированных уровней в клетках THP-1. и до уровней, меньших или равных уровням, наблюдаемым в контрольных образцах клеток BEAS-2B и A549 (фиг. 7). Эти результаты были подтверждены иммунофлуоресцентным анализом экспрессии p-p65 и субклеточной локализации, демонстрирующим повышенный ядерный p-p65, индуцированный LPS, и притупление этого явления EISO при 0.001 и 0,002%. Эти результаты показывают, что противовоспалительная активность EISO включает ингибирование активации этого центрального модулятора реакции на стресс.

РИСУНОК 7. Масло восточно-индийского сандалового дерева подавляет экспрессию p-p65 в клетках DF (A) , BEAS-2B (B) , A549 (C) и THP-1 клетках (D) . Клетки обрабатывали носителем (0), LPS (1 мкг / мл), LPS + EISO (0,001 или 0,002%) в течение 48 часов. Клетки окрашивали для иммунофлуоресцентной визуализации, как описано в разделе «Материалы и методы» (слева), чтобы показать p-p65 (зеленый), актиновые филаменты (красные) и ядра (синие).Все окрашенные слайды были отображены с использованием 40-кратного объектива и идентичного увеличения после захвата. Экспрессию p-p65 всех четырех клеточных линий также анализировали с помощью ELISA (справа). Данные представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего ( n = 4). ^∗ p <0,05, ^∗∗ p <0,01 и ^∗∗∗ p <0,001 по сравнению с контролем; ^† p <0,05, ^†† p <0,01, ^††† p <0,001 по сравнению с клетками, стимулированными LPS.

Обсуждение

Эритродермия, характерный признак воспалительных кожных заболеваний, таких как PS и AD, возникает в результате иммунной дисрегуляции, которая приводит к инфильтрации воспалительных клеток в кожу, взаимодействию цитокинов, хемокинов, молекул межклеточной адгезии и увеличению оборота кератиноцитов (Sigurdsson et al. , 2000). Текущие методы лечения включают смягчающие средства, добавки витамина D, местные ингибиторы кальциневрина и местные кортикостероиды (TCS) (Weidinger and Novak, 2016).Несмотря на свою эффективность, TCS может вызывать побочные эффекты, включая повышенную восприимчивость к инфекциям и атрофию кожи, а отсутствие реакции на эти местные средства может привести к лечению пациентов биологическими препаратами, чаще всего ингибиторами TNF-α. Биопрепараты дороги и требуют повторных инъекций; следовательно, поиск менее дорогих альтернатив продолжается. Хотя при поиске пероральных средств лечения преобладали киназные мишени, низкомолекулярные ингибиторы ФДЭ4, такие как недавно одобренный препарат кризаборол, вызывают большой интерес (Paller et al., 2016).

Восточно-индийское масло сандалового дерева использовалось с древних времен как традиционная медицина, в ароматерапии, как противовоспалительное, вяжущее, антисептическое и противораковое средство (Dwivedi et al., 2005, 2006; Burdock and Carabin, 2008; Santha et al., 2013). Его антисептические и противовоспалительные свойства сделали его популярным традиционным средством от различных кожных проблем. Противовоспалительный эффект был продемонстрирован в клиническом исследовании фазы 2 с участием пятидесяти пациентов с угрями, где у 90% пациентов наблюдалось улучшение после 2 месяцев лечения (Moy et al., 2012). Лечение хорошо переносилось с быстрым уменьшением покрасневших воспаленных участков. Кроме того, аналогичные открытые, подтверждающие концепцию клинические испытания Фазы 2 препаратов EISO для местного применения для лечения БА (Browning et al., 2017) и псориаза (Sharma et al., 2017) оказались безопасными и надежными. переносился и показал начальные признаки эффективности. Как ни странно, у пациента, показанного на Рисунке 1, также была сопутствующая инфекция MRSA, которая разрешилась лечением. Наш отчет здесь о том, что подавляющее большинство педиатрических пациентов с AD достигли основной конечной точки исследования без каких-либо доказательств нежелательных явлений или проблем с безопасностью, теперь расширяет эффективность местного EISO для лечения этой кожной воспалительной патологии.

Хотя механизмы действия EISO полностью не выяснены, было показано, что санталолы, полученные из EISO, обладают существенными противовоспалительными свойствами на моделях кожи, которые связаны с подавлением продукции простагландинов и тромбоксанов и экспрессии цитокинов / хемокинов (Sharma et al., 2014 ). Сообщается, что PDE4 является ключевым модулятором про- и противовоспалительных медиаторов как в иммунных (врожденных и адаптивных), так и в неиммунных клетках (Zambon et al., 2005). LPS может стимулировать увеличение общей клеточной активности PDE, а EISO может эффективно блокировать эту активацию PDE до уровней, сопоставимых с уровнем образцов, обработанных неспецифическими и PDE4-специфическими ингибиторами.В то время как PDE4 и 7 являются преобладающими классами гидролиза цАМФ, обнаруженными в иммунных клетках, PDE4 является доминирующей изоформой в воспалительных клетках и высоко экспрессируется в клетках прогрессирующих псориатических поражений (например, кератиноцитах, эндотелии сосудов и синовиальной мембране) (Schafer, 2012). , и PDE4B, как сообщается, является основным PDE, активируемым стимуляцией LPS (Oliva et al., 2012). Хотя мы не можем сделать вывод, что влияние EISO на активность PDE является эффектом, специфичным для конкретного подкласса PDE, наша демонстрация того, что EISO может противодействовать LPS-стимулированной экспрессии транскриптов подклассов PDE4 и 7, а также реверсировать псориатическую патологию и экспрессию PDE4, согласуется с Противовоспалительные свойства EISO.Наше наблюдение, что ESIO может специфически ослаблять активность гидролиза цАМФ в ферментативном анализе in vitro на фиг. 3В, предполагает, что подавленная активность гидролиза цАМФ с помощью EISO или PDE-селективных ингибиторов на фиг. 2, 3А была вызвана влиянием на сами ферменты. Сопутствующее снижение уровней транскриптов наиболее аннотированных изоформ PDE, гидролизующих цАМФ, PDE4 и 7, при лечении EISO согласуется с известной активацией экспрессии PDE в ответ на воспалительный стресс (Smith et al., 2004; Огер и др., 2005; Schafer et al., 2014) и предыдущие сообщения о том, что EISO является мощным противовоспалительным агентом (Sharma et al., 2014, 2017; Bommareddy et al., 2017). Наша демонстрация способности EISO модулировать экспрессию белка и распределение PDE4 в органоидах с помощью IHC (рис. 5) подтверждает наблюдаемое EISO-опосредованное подавление транскрипции PDE4 и указывает на то, что EISO может подавлять как активность, так и экспрессию изоформ PDE4.

Многочисленные исследования, описывающие повышенную экспрессию PDE4 и гидролиз цАМФ при воспалительных синдромах.Первоначальные исследования показали, что воздействие ЛПС на человеческие моноциты приводит к увеличению уровней мРНК и повышению активности PDE4 (Kotera et al., 1997; van Staveren and Markerink-van Ittersum, 2005). Подобная стимуляция LPS экспрессии PDE4 и активность гидролиза цАМФ была продемонстрирована в мышиных PBMC и макрофагах (Lugnier et al., 1999), этот ответ полностью отсутствовал у мышей с дефицитом PDE4 (Jin and Conti, 2002). Повышенная активность PDE4 наблюдается в экспериментальных моделях системного ответа LPS (Koga et al., 1995; Guo et al., 2014), и, как мы также показали здесь, ингибиторы PDE снижают LPS-индуцированный синтез и высвобождение цитокинов (Dousa, 1999). Показано, что селективный ингибитор PDE4, циломиласт, является эффективным средством лечения ХОБЛ (Ouagued et al., 2005), в то время как первый селективный ингибитор PDE4, ролипрам, снижает LPS-индуцированную нейтрофилию легких на моделях грызунов (Miotla et al., 1998; Toward and Broadley, 2001). Известно, что селективный ингибитор ФДЭ, ролипрам, блокирует индуцированный этанолом гидролиз цАМФ и передачу сигналов NF-κB (Gobejishvili et al., 2008). NF-κB является важным транскрипционным регулятором онкогенеза, апоптоза, репликации вирусов, воспалительных реакций и различных аутоиммунных заболеваний (Baldwin, 1996) и является частью стрессовых реакций, активируемых стимулами, включая фармакологические агенты, УФ, компоненты бактериальной клеточной стенки, факторы роста и т. Д. цитокины (An et al., 2002).

Это первое сообщение о том, что EISO способен подавлять LPS-стимулированную активацию NF-κB и, как следствие, экспрессию цитокинов и хемокинов, а также снижать транскрипцию и активацию PDE, предполагает, что EISO может противодействовать провоспалительным стимулам, подавляя способность PDE гидролизовать цАМФ и тем самым позволяя PKA-опосредованное ослабление активации NF-κB.Кроме того, чтобы продемонстрировать пользу активности против ФДЭ для лечения воспалительных патологий кожи, это повышает вероятность того, что нацеливание на ФДЭ4 и / или 7 может быть использовано в качестве альтернативного терапевтического подхода, который может снизить побочные эффекты, связанные с нацеливанием на других членов семейства ФДЭ. . Многообещающие предварительные результаты клинических испытаний, указывающие на эффективность методов лечения EISO для лечения воспалительных кожных заболеваний, вместе со способностью EISO снижать активацию NF-κB путем подавления провоспалительной стимуляции транскрипции PDE и прямого подавления ферментативной активности PDE, являются сильным основанием для продолжения изучение EISO как потенциального нового терапевтического средства для лечения воспалительных состояний кожи, таких как PS и AD.

Взносы авторов

MC, MS и CL отвечали за дизайн исследования. МС и МС были выполнены все исследований in vitro . JB и EB были проведены клинические исследования. Santalis Pharmaceuticals, Inc. (CL, IC и PC) предоставила EISO для экспериментального использования и разработала клиническое исследование. Рукопись была написана MC, MS и CL, а все другие авторы предоставили редакционные советы.

Финансирование

Клиническое исследование спонсировалось Santalis Pharmaceuticals, Inc.Лабораторные исследования были поддержаны соглашением о совместных исследованиях между MC и Santalis Pharmaceuticals, Inc. (UBC-F1502441).

Заявление о конфликте интересов

CL, IC и PC являются сотрудниками Santalis Pharmaceuticals, Inc.

Другие авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих и финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Благодарности

Гистологическая поддержка была предоставлена ​​Центром патологии Терри Фокса / Ванкуверского центра простаты.Доктор Ладан Фазли предоставил анализ патологии.

Список литературы

Абдоллахи А., Мортеза А., Халилзаде О. и Ахмадзаде А. (2011). Концентрация фактора VIII выше у женщин, чем у мужчин с ВИЧ-инфекцией. Внутр. J. Hematol. 93, 53–58. DOI: 10.1007 / s12185-010-0736-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Адкок, И. М., Карамори, Г., и Барнс, П. Дж. (2011). Хроническая обструктивная болезнь легких и рак легких: новые молекулярные открытия. Дыхание 81, 265–284. DOI: 10.1159 / 000324601

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ан, Х., Ю, Й., Чжан, М., Сюй, Х., Ци, Р., Янь, X., и др. (2002). Участие передачи сигналов ERK, p38 и NF-κB в регуляции экспрессии генов TLR2, TLR4 и TLR9, индуцированной липополисахаридом в дендритных клетках мыши. Иммунология 106, 38–45. DOI: 10.1046 / j.1365-2567.2002.01401.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аркрайт, П.D., Motala, C., Subramanian, H., Spergel, J., Schneider, L.C, Wollenberg, A., et al. (2013). Лечение трудноизлечимого атопического дерматита. J. Allergy Clin. Иммунол. Практик. 1, 142–151. DOI: 10.1016 / j.jaip.2012.09.002

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ашрафиан, Х., О’Флаэрти, Л., Адам, Дж., Стиплз, В., Чанг, Ю. Л., Ист, П., и др. (2010). Профили экспрессии на прогрессирующих стадиях дефицита фумарат-гидратазы: вклад метаболических изменений в онкогенез. Cancer Res. 70, 9153–9165. DOI: 10.1158 / 0008-5472.CAN-10-1949

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Болдуин А.С. младший (1996). Белки NF-κB и I κB: новые открытия и идеи. Annu. Rev. Immunol. 14, 649–683. DOI: 10.1146 / annurev.immunol.14.1.649

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Беккер-Сантос, Д. Д., Го, Ю., Гаффари, М., Викерс, Э. Д., Леман, М., Альтамирано-Димас, М., и др. (2012).Интегрин-связанная киназа как мишень для ERG-опосредованных инвазивных свойств в моделях рака простаты. Канцерогенез 33, 2558–2567. DOI: 10.1093 / carcin / bgs285

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бьорго, Э., Таскен, К. (2006). Роль цАМФ фосфодиэстеразы 4 в регуляции функции Т-клеток. Crit. Rev. Immunol. 26, 443–451. DOI: 10.1615 / CritRevImmunol.v26.i5.40

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бланшар, Э., Zlock, L., Lao, A., Mika, D., Namkung, W., Xie, M., et al. (2014). Заякоренный PDE4 регулирует хлоридную проводимость в эпителии дыхательных путей человека дикого типа и DeltaF508-CFTR. FASEB J. 28, 791–801. DOI: 10.1096 / fj.13-240861

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Боммаредди, А., Брозена, С., Стейгервальт, Дж., Ландис, Т., Хьюз, С., Мабри, Э. и др. (2017). Лечебные свойства α-санталола, природного компонента сандалового масла: обзор. Нац. Prod. Res. doi: 10.1080 / 14786419.2017.1399387 [Epub перед печатью].

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Браунинг Дж. К., Рок Дж., Левенсон К. и Беккер Э. М. (2017). «Безопасность, переносимость и эффективность новой схемы, содержащей 0,1% коллоидной овсянки и восточно-индийского масла сандалового дерева (EISO) для лечения легкой, средней и тяжелой детской экземы (атопического дерматита) — результаты одноцентрового открытого исследования , ”В Плакат на Орландо дерматологической и клинической эстетической конференции , Дорал, Флорида.

Кэрролл, К. Л., Балкришнан, Р., Фельдман, С. Р., Флейшер, А. Б. Младший, и Мануэль, Дж. К. (2005). Бремя атопического дерматита: влияние на пациента, семью и общество. Педиатр. Дерматол. 22, 192–199. DOI: 10.1111 / j.1525-1470.2005.22303.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кирикоцци, А., Суарес-Фариньяс, М., Фуэнтес-Дукулан, Дж., Куэто, И., Ли, К., Тиан, С., и др. (2016). Повышенная экспрессия генов пути интерлейкина-17 в коже без повреждений при вульгарном псориазе средней и тяжелой степени. руб. J. Dermatol. 174, 136–145. DOI: 10.1111 / bjd.14034

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кокс, М. Э., Дибл, П. Д., Лакхани, С., и Парсонс, С. Дж. (1999). Приобретение нейроэндокринных характеристик опухолевыми клетками простаты обратимо: последствия для прогрессирования рака простаты. Cancer Res. 59, 3821–3830.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Чарновицкий, Т., Крюгер, Дж. Г., и Гутман-Ясский, Э.(2014). Кожный барьер и нарушение иммунной регуляции при атопическом дерматите: развивающаяся история с важными клиническими последствиями. J. Allergy Clin. Иммунол. Практик. 2, 371–379; викторина 380–381. DOI: 10.1016 / j.jaip.2014.03.006

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Доуса, Т. П. (1999). Изоферменты циклической 3 ‘, 5’-нуклеотидной фосфодиэстеразы в клеточной биологии и патофизиологии почек. Kidney Int. 55, 29–62. DOI: 10.1046 / j.1523-1755.1999.00233.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Двиведи, К., Мейдью, Э. Р., Хора, Дж. Дж., Рамакер, Д. М., и Гуан, X. (2005). Химиопрофилактические эффекты различных концентраций α-санталола на развитие рака кожи у мышей CD-1. евро. J. Cancer Prev. 14, 473–476.

Google Scholar

Двиведи К., Валлури Х. Б., Гуан Х. и Агарвал Р. (2006). Химиопрофилактические эффекты α-санталола на индуцированное ультрафиолетовым излучением B развитие опухоли кожи у безволосых мышей SKH-1. Канцерогенез 27, 1917–1922. DOI: 10.1093 / carcin / bgl058

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Элвуд, К. Н., Ланге, Д., Надо, Р., Сени, С., Саммерс, К., Чу, Б. Х. и др. (2010). Новая модель in vitro для изучения повреждения клеток мочеточниковым стентом. BJU Int. 105, 1318–1323. DOI: 10.1111 / j.1464-410X.2009.09001.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гиттлер, Дж.K., Shemer, A., Suárez-Fariñas, M., Fuentes-Duculan, J., Gulewicz, K.J., Wang, C.Q., et al. (2012). Прогрессивная активация цитокинов T (H) 2 / T (H) 22 и селективных эпидермальных белков характеризует острый и хронический атопический дерматит. J. Allergy Clin. Иммунол. 130, 1344–1354. DOI: 10.1016 / j.jaci.2012.07.012

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гобеджишвили, Л., Барве, С., Джоши-Барве, С., и Макклейн, К. (2008). Повышенная экспрессия PDE4B увеличивает LPS-индуцируемую экспрессию TNF в моноцитах, примированных этанолом: актуальность для алкогольной болезни печени. Am. J. Physiol. Гастроинтест. Liver Physiol. 295, G718 – G724. DOI: 10.1152 / ajpgi..2008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гроссман, Р. М., Крюгер, Дж., Юриш, Д., Гранелли-Пиперно, А., Мерфи, Д. П., Мэй, Л. Т. и др. (1989). Интерлейкин 6 экспрессируется в больших количествах в псориатической коже и стимулирует пролиферацию культивируемых кератиноцитов человека. Proc. Natl. Акад. Sci. США 86, 6367–6371. DOI: 10.1073 / pnas.86.16.6367

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Го, Дж., Лин, П., Чжао, X., Чжан, Дж., Вэй, X., Ван, К., и др. (2014). Этазолат отменяет индуцированное липополисахаридом (LPS) подавление передачи сигналов cAMP / pCREB / BDNF, нейровоспалительного ответа и депрессивного поведения у мышей. Неврология 263, 1–14. DOI: 10.1016 / j.neuroscience.2014.01.008

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гутман-Ясский, Э., Ногралес, К. Э., и Крюгер, Дж. Г. (2011). Противоположный патогенез атопического дерматита и псориаза — часть I: клинические и патологические концепции. J. Allergy Clin. Иммунол. 127, 1110–1118. DOI: 10.1016 / j.jaci.2011.01.053

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ханифин, Дж. М., Терстон, М., Омото, М., Черилл, Р., Тофте, С. Дж., Грэбер, М. и др. (2001). Индекс площади и тяжести экземы (EASI): оценка надежности при атопическом дерматите.EASI Evaluator Group. Exp. Дерматол. 10, 11–18. DOI: 10.1034 / j.1600-0625.2001.100102.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Houslay, M. D., Schafer, P., and Zhang, K. Y. (2005). Основной обзор: фосфодиэстераза-4 как терапевтическая мишень. Drug Discov. Сегодня 10, 1503–1519. DOI: 10.1016 / S1359-6446 (05) 03622-6

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джин, С. Л., и Конти, М. (2002).Индукция циклической нуклеотидной фосфодиэстеразы PDE4B важна для LPS-активируемых ответов TNF-α. Proc. Natl. Акад. Sci. США 99, 7628–7633. DOI: 10.1073 / pnas.122041599

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кога, С., Моррис, С., Огава, С., Ляо, Х., Билезикян, Дж. П., Чен, Г. и др. (1995). TNF модулирует свойства эндотелия, уменьшая цАМФ. Am. J. Physiol. 268, C1104 – C1113. DOI: 10.1152 / ajpcell.1995.268.5.C1104

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Котера, Дж., Янака, Н., Фудзисигэ, К., Имаи, Ю., Акацука, Х., Исидзука, Т. и др. (1997). Экспрессия крысиной цГМФ-связывающей цГМФ-специфической мРНК фосфодиэстеразы в слоях клеток Пуркинье во время постнатального развития нейронов. евро. J. Biochem. 249, 434–442. DOI: 10.1111 / j.1432-1033.1997.t01-1-00434.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Лешем Ю.А., Хаджар, Т., Ханифин, Дж. М., и Симпсон, Э. Л. (2015). Что оценка площади экземы и индекса тяжести говорит нам о тяжести атопического дерматита: исследование интерпретируемости. руб. J. Dermatol. 172, 1353–1357. DOI: 10.1111 / bjd.13662

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Lugnier, C., Keravis, T., Le Bec, A., Pauvert, O., Proteau, S., and Rousseau, E. (1999). Характеристика изоформ циклической нуклеотидной фосфодиэстеразы, ассоциированных с изолированными ядрами сердца. Биохим. Биофиз. Acta 1472, 431–446. DOI: 10.1016 / S0304-4165 (99) 00145-2

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Маккензи, С. Дж., И Хауслей, М. Д. (2000). Действие ролипрама на специфические изоформы фосфодиэстеразы цАМФ PDE4 и на фосфорилирование белка, связывающего элемент цАМФ (CREB) и киназы митоген-активированного протеина p38 (MAP) в моноцитарных клетках U937. Biochem. J. 347, 571–578. DOI: 10.1042 / 0264-6021: 3470571

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Манчини, А.Дж., Каулбак К. и Чамлин С. Л. (2008). Социально-экономические последствия атопического дерматита в США: систематический обзор. Педиатр. Дерматол. 25, 1–6. DOI: 10.1111 / j.1525-1470.2007.00572.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мартинес А. и Гил К. (2014). Ингибиторы цАМФ-специфической фосфодиэстеразы: перспективные препараты при воспалительных и неврологических заболеваниях. Мнение эксперта. Ther. Пат. 24, 1311–1321. DOI: 10.1517 / 13543776.2014.968127

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Михальский, Дж. М., Голден, Г., Икари, Дж., И Реннард, С. И. (2012). ФДЭ4: новая мишень в лечении хронической обструктивной болезни легких. Clin. Pharmacol. Ther. 91, 134–142. DOI: 10.1038 / clpt.2011.266

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Миотла, Дж. М., Тейшейра, М. М., и Хеллуэлл, П. Г. (1998). Подавление острого повреждения легких у мышей ингибитором фосфодиэстеразы 4 типа. Am. J. Respir. Cell Mol. Биол. 18, 411–420. DOI: 10.1165 / ajrcmb.18.3.2913

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Мой Р. Л., Левенсон К., Со Дж. Дж. И Рок Дж. А. (2012). Одноцентровое открытое исследование патентованной схемы местного лечения на основе 0,5% салициловой кислоты, содержащей масло сандалового дерева, у подростков и взрослых с акне легкой и средней степени тяжести. J. Drugs Dermatol. 11, 1403–1408.

PubMed Аннотация | Google Scholar

Нода, С., Крюгер, Дж. Г., Гутман-Ясский, Э. (2015). Трансляционная революция и использование биопрепаратов у пациентов с воспалительными кожными заболеваниями. J. Allergy Clin. Иммунол. 135, 324–336. DOI: 10.1016 / j.jaci.2014.11.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ногралес, К. Э., Заба, Л. К., Гутман-Ясски, Э., Фуэнтес-Дукулан, Дж., Суарес-Фариньяс, М., Кардинале, И. и др. (2008). Цитокины Th27, интерлейкин (IL) -17 и IL-22 модулируют различные пути воспалительного ответа и реакции кератиноцитов. руб. J. Dermatol. 159, 1092–1102. DOI: 10.1111 / j.1365-2133.2008.08769.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Огер С., Мехатс К., Даллот Э., Каброл Д. и Лерой М. Дж. (2005). Доказательства роли фосфодиэстеразы 4 в стимулированном липополисахаридом производстве простагландина E2 и активности матриксной металлопротеиназы-9 в амниохорионных мембранах человека. J. Immunol. 174, 8082–8089. DOI: 10.4049 / jimmunol.174.12.8082

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ольденбургер, А., Roscioni, S. S., Jansen, E., Menzen, M. H., Halayko, A. J., Timens, W., et al. (2012). Противовоспалительная роль эффекторов цАМФ Epac и PKA: значение при хронической обструктивной болезни легких. PLoS One 7: e31574. DOI: 10.1371 / journal.pone.0031574

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Олива А.А. младший, Канг Ю., Фуронес К., Алонсо О. Ф., Бруно О., Дитрих В. Д. и др. (2012). Специфическая экспрессия изоформы фосфодиэстеразы, вызванная черепно-мозговой травмой. J. Neurochem. 123, 1019–1029. DOI: 10.1111 / jnc.12049

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Уагуед М., Мартин-Чоули К.А., Бриншо Г., Лепортье-Комой К., Депинсе А., Бертран К. и др. (2005). Новый ингибитор фосфодиэстеразы 4, CI-1044, подавляет LPS-индуцированную продукцию TNF-α в цельной крови пациентов с ХОБЛ. Pulm. Pharmacol. Ther. 18, 49–54. DOI: 10.1016 / j.pupt.2004.09.031

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Паллер, А.С., Том, В. Л., Лебволь, М. Г., Блюменталь, Р. Л., Богуневич, М., Калл, Р. С. и др. (2016). Эффективность и безопасность мази кризаборола, нового нестероидного ингибитора фосфодиэстеразы 4 (PDE4) для местного лечения атопического дерматита (AD) у детей и взрослых. J. Am. Акад. Дерматол. 75, 494.e6–503.e6. DOI: 10.1016 / j.jaad.2016.05.046

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Паризи Р., Симмонс Д. П., Гриффитс К. Э. и Эшкрофт Д.М. (2013). Глобальная эпидемиология псориаза: систематический обзор заболеваемости и распространенности. J. Invest. Дерматол. 133, 377–385. DOI: 10.1038 / jid.2012.339

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Парри, Г. К., и Макман, Н. (1997). Роль белка, связывающего элемент ответа на циклический АМФ, в ингибировании циклическим АМФ транскрипции, опосредованной NF-κB. J. Immunol. 159, 5450–5456.

Google Scholar

Пулламсетти, С.S., Banat, G.A., Schmall, A., Szibor, M., Pomagruk, D., Hänze, J., et al. (2013). Фосфодиэстераза-4 способствует пролиферации и ангиогенезу рака легких за счет перекрестного взаимодействия с HIF. Онкоген 32, 1121–1134. DOI: 10.1038 / onc.2012.136

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Santha, S., Bommareddy, A., Rule, B., Guillermo, R., Kaushik, R. S., Young, A., et al. (2013). Противоопухолевые эффекты α-санталола на клетки рака молочной железы, положительные и отрицательные по рецепторам эстрогена, посредством остановки клеточного цикла в фазе G2 / M и индукции апоптоза. PLoS One 8: e56982. DOI: 10.1371 / journal.pone.0056982

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schafer, P.H., Parton, A., Capone, L., Cedzik, D., Brady, H., Evans, J.F., et al. (2014). Апремиласт — селективный ингибитор PDE4, регулирующий врожденный иммунитет. Ячейка. Сигнал. 26, 2016–2029. DOI: 10.1016 / j.cellsig.2014.05.014

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Schett, G., Слоан В. С., Стивенс Р. М. и Шафер П. (2010). Апремиласт: новый ингибитор ФДЭ4 при лечении аутоиммунных и воспалительных заболеваний. Ther. Adv. Опорно-двигательный аппарат. Дис. 2, 271–278. DOI: 10,1177 / 1759720X10381432

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сейболд, Дж., Ньютон, Р., Райт, Л., Финни, П. А., Сатторп, Н., Барнс, П. Дж. И др. (1998). Индукция фосфодиэстераз 3B, 4A4, 4D1, 4D2 и 4D3 в Т-клетках Jurkat и в Т-лимфоцитах периферической крови человека 8-бром-цАМФ и агонистами рецепторов, связанных с G _s .Возможная роль в десенсибилизации β ₂ -адренорецепторов. J. Biol. Chem. 273, 20575–20588. DOI: 10.1074 / jbc.273.32.20575

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шарма М., Левенсон К., Белл Р. Х., Андерсон С. А., Хадсон Дж. Б., Коллинз К. С. и др. (2014). Подавление стимулированного липополисахаридом производства цитокинов / хемокинов в клетках кожи маслами сандалового дерева, очищенным α-санталолом и бета-санталолом. Phytother.Res. 28, 925–932. DOI: 10.1002 / ptr.5080

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Шарма М., Левенсон К., Клементс И., Кастелла П., Гебауэр К. и Кокс М. Е. (2017). Масло восточно-индийского сандалового дерева (EISO) облегчает воспалительные и пролиферативные патологии псориаза. Фронт. Pharmacol. 8: 125. DOI: 10.3389 / fphar.2017.00125

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Сигурдссон, В., Фрис, И.J., Toonstra, J., Bihari, I.C, Thepen, T., Bruijnzeel-Koomen, C.A., et al. (2000). Экспрессия VCAM-1, ICAM-1, E-селектина и P-селектина на эндотелии in situ у пациентов с эритродермией, грибовидным микозом и атопическим дерматитом. Дж. Кутан. Патол. 27, 436–440. DOI: 10.1034 / j.1600-0560.2000.027009436.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Смит, С. Дж., Цеслински, Л. Б., Ньютон, Р., Доннелли, Л. Э., Фенвик, П. С., Николсон, А.G., et al. (2004). Открытие BRL 50481 [3- (N, N-диметилсульфонамидо) -4-метил-нитробензол], селективного ингибитора фосфодиэстеразы 7: в исследованиях in vitro на человеческих моноцитах, макрофагах легких и CD8 + Т-лимфоцитах. Мол. Pharmacol. 66, 1679–1689. DOI: 10,1124 / моль. 104,002246

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Такахаши Н., Тецука Т., Ураниши Х. и Окамото Т. (2002). Ингибирование транскрипционной активности NF-κB протеинкиназой А. евро. J. Biochem. 269, 4559–4565. DOI: 10.1046 / j.1432-1033.2002.03157.x

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Тан, С. С., Ляо, П. Ю., Хунг, С. Дж., Ге, Дж. С., Чен, С. М., Лай, Дж. С. и др. (2017). Местное применение гликолевой кислоты подавляет воспаление, вызванное УФ-В, IL-6, IL-8, MCP-1 и COX-2, модулируя сигнальный путь NF-κB в кератиноцитах и ​​коже мышей. J. Dermatol. Sci. 86, 238–248. DOI: 10.1016 / j.jdermsci.2017.03.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

В сторону, Т.Дж. И Бродли К. Дж. (2001). Хроническое воздействие липополисахаридов на функцию дыхательных путей, клеточную инфильтрацию и образование оксида азота у морских свинок в сознании: влияние ролипрама и дексаметазона. J. Pharmacol. Exp. Ther. 298, 298–306.

PubMed Аннотация | Google Scholar

van Staveren, W. C., and Markerink-van Ittersum, M. (2005). Локализация циклической гуанозин-3 ‘, 5’-монофосфат-гидролизующей фосфодиэстеразы типа 9 в головном мозге крысы путем нерадиоактивной гидридизации in situ . Methods Mol. Биол. 307, 75–84. DOI: 10.1385 / 1-59259-839-0: 075

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Вейдингер, С., Новак, Н. (2016). Атопический дерматит. Ланцет 387, 1109–1122. DOI: 10.1016 / S0140-6736 (15) 00149-X

CrossRef Полный текст

Виттманн М. и Хелливелл П. С. (2013). Ингибирование фосфодиэстеразы 4 при лечении псориаза, псориатического артрита и других хронических воспалительных заболеваний. Dermatol.Ther. 3, 1–15. DOI: 10.1007 / s13555-013-0023-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Райт, Л. К., Сейболд, Дж., Робишо, А., Адкок, И. М., и Барнс, П. Дж. (1998). Экспрессия фосфодиэстеразы в эпителиальных клетках человека. Am. J. Physiol. 275, L694 – L700. DOI: 10.1152 / ajplung.1998.275.4.L694

CrossRef Полный текст | Google Scholar

Янг, И. А., Релан, В., Райт, К. М., Дэвидсон, М. Р., Шрирам, К. Б., Саваримуту Фрэнсис, С.М., et al. (2011). Общие патогенетические механизмы и пути развития ХОБЛ и рака легких. Мнение эксперта. Ther. Targets 15, 439–456. DOI: 10.1517 / 14728222.2011.555400

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Zambon, A.C., Zhang, L., Minovitsky, S., Kanter, J.R., Prabhakar, S., Salomonis, N., et al. (2005). Паттерны экспрессии генов определяют ключевые транскрипционные события в регуляции клеточного цикла с помощью цАМФ и протеинкиназы A. Proc.Natl. Акад. Sci. США 102, 8561–8566. DOI: 10.1073 / pnas.0503363102

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

масло сандалового дерева, 8006-87-9

1-пара-

900/901 FR

Масло сандалового дерева натурального типа | Vigon

Артикул: 512026 CAS: Смесь

Сила запаха: средний
Описание запаха: древесный, бальзамический, сладкий, ладан

Масло сандалового дерева — один из самых востребованных экстрактов в парфюмерной промышленности.Сандал, как следует из названия, представляет собой древесный экстракт, который чаще всего используется в качестве фиксирующей базовой ноты. Его часто описывают как древесный, сладкий и приятно бальзамический. Его используют в культовых напитках, таких как Santal 33 от Le Labo, Chanel’s Coco Eau de Parfum и Byredo’s Blanche.

Приличная цена на эфирное масло сандалового дерева становится полностью понятной, если изучить процесс производства экстракта. От посадки семени дерева до первой капли произведенного масла — эфирное масло сандалового дерева — это труд любви.Сандал родом из Индии и Азии. Сегодня большая часть сандалового дерева по-прежнему выращивается в этих регионах, а наиболее востребованным маслом является регион Майсур (Мисуру) в Индии.

На начальных этапах своего роста сандаловое дерево фактически паразитирует, вымывая питательные вещества непосредственно из корней других деревьев вокруг себя. Это не сильно повреждает хост-дерево. Сандаловому дереву требуется около 30 лет, чтобы достичь необходимой зрелости для извлечения эфирного масла. Тем не менее, масло сандалового дерева высочайшего качества получают из деревьев старше 60 лет.Как правило, чем старше древесина, тем ценнее эфирное масло, полученное из нее.

Сандал на самом деле имеет невероятно богатую историю из-за его редкой природы и сложного процесса производства. В конце 1990-х производство сандалового дерева в Индии процветало — до неустойчивой степени. Производство и рост деревьев представляли огромную угрозу для окружающей среды. Вскоре после этого индийская среда фактически запретила производство сандалового масла. Как и во многих случаях, когда правительство запрещает хорошее производство, черный рынок и организованная преступность, окружающая добычу, преследовали Индию.Вираппан — печально известный руководитель этих преступлений — был казнен индийским правительством за свою причастность.

При обсуждении сандалового дерева важно понимать различия между различными разновидностями экстракта. Масло, полученное из Santalum albu m, является разновидностью, которую обычно предпочитают парфюмеры. Это сандал, выращиваемый в Майсуре, известен своим сливочным, сладким и древесным ароматом. В последние годы в Индии началось производство Santalum Spicatum .Масло австралийского сандалового дерева производится более экологически рационально, но оно не идеально подходит для оригинального альбома Santalum из Майсура. Австралийский экстракт обладает легким животным привкусом, который некоторым кажется кожистым или сеновидным. Чтобы противостоять этому, австралийский сандал часто подвергается двойной дистилляции для создания экстракта с ароматом, намного более близким к его индийскому аналогу. Лидеры отрасли F&F, такие как Symrise и Givaudan, также весьма успешно производят высококачественные синтетические заменители сандалового масла.

Чтобы подготовиться к добыче масла, все сандаловое дерево вырывается с корнем — это означает, что для производства одной партии сандалового масла требуется не менее 30 лет. Древесина и корни дерева измельчаются в порошок, чтобы увеличить выход масла. Затем проводится паровая перегонка для извлечения масла. Эфирное масло сандалового дерева богато ароматическими соединениями, такими как альфа-санталол и бета-санталол.

Парфюмеры используют эфирное масло сандалового дерева в качестве закрепляющей основы для создания древесной основы для ароматов.Он сочетается с такими аккордами, как жасмин, роза, ваниль и лаванда, чтобы усилить пудрово-сладкие ноты в женских ароматах. Для древесных мужских композиций сандаловое дерево сочетается с ветивером, табаком и амброй. Он также используется в вариациях шипровых композиций, включающих бергамот, амбру и дубовый мох.

В течение многих лет сандаловое дерево использовалось в повседневной ароматерапии в домашних условиях и в церемониальных, священных практиках в Индии и Азии. Масло сандалового дерева раньше ароматизировало благовония, которые горели во многих религиозных храмах на Востоке.Масло исторически использовалось в ряде религиозных ритуалов и практик. Сегодня считается, что при распылении он оказывает осветляющее действие и обладает полезными свойствами для волос и кожи.

Vigon’s Sandalwood Oil Type Natural

Если вы хотите увидеть образец или разместить заказ, отправьте электронное письмо Николасу Борну по адресу [email protected] или позвоните по телефону 570-422-6026.

Эфирное масло австралийского сандалового дерева | Растительная терапия

Чтобы просмотреть варианты доставки, перейдите к любому товару и нажмите «Оценить доставку» или добавьте товары в корзину.Когда вы пройдете через оформление заказа, вам будет предоставлена ​​стоимость доставки. Если вам не нравится стоимость доставки, вы можете отменить свой заказ до того, как ваш платеж будет обработан.

• Бесплатная доставка (Бесплатная для всех розничных клиентов в США. Ориентировочная доставка 2–5 рабочих дней. Доставка в тот же день, если заказ размещен до 12:00 по московскому времени)
• USPS Priority Mail (обновление всего за 4,99 доллара США. Ориентировочная доставка 2–3 рабочих дня).
• Экспресс-почта USPS (Стоимость будет указана при оформлении заказа. Срок доставки 1–2 рабочих дня.)
• FedEx 2 дня (Стоимость будет указана при оформлении заказа. Ориентировочная доставка 2 рабочих дня.)
• FedEx Overnight (Стоимость будет указана при оформлении заказа. Ориентировочная доставка 1 рабочий день.)

^* ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ: Наше ежедневное время доставки — 12:00 PM MST. Если вы сделаете заказ после 12:00 PM MST, ваш заказ может быть отправлен на следующий рабочий день. Расчетные сроки доставки указаны в рабочих днях и не включают выходные. Пожалуйста, внимательно выбирайте способ доставки во время оформления заказа, чтобы ваш заказ был доставлен в нужную вам дату.

Мы отправляем по всему миру. Расчетное время международной доставки составляет 7-21 рабочий день. Чтобы увидеть наши очень доступные тарифы на доставку, перейдите к любому товару и нажмите «Рассчитать стоимость доставки» или добавьте товары в корзину. Когда вы пройдете через оформление заказа, вам будет предоставлена ​​стоимость доставки. Если вам не нравится стоимость доставки, вы можете отменить свой заказ до того, как ваш платеж будет обработан.

Международная доставка бесплатно

• Канада розничные клиенты получают бесплатную доставку при покупке на сумму 75 долларов и более.Все посылки отправляются с уплатой пошлин, таможенных пошлин и налогов.
• Австралия, Бельгия, Хорватия, Дания, Эстония, Финляндия, Франция, Германия, Гибралтар, Гонконг, Венгрия, Ирландия, Израиль, Италия, Япония, Латвия, Литва, Люксембург, Малайзия, Мальта, Нидерланды, Новая Зеландия, Португалия, Россия, Сингапур, Южная Корея, Испания, Швеция и Швейцария розничных клиентов получают бесплатную доставку при покупке на сумму от 75 долларов США. Все посылки отправляются без уплаты пошлин, таможенных пошлин и налогов.Покупатель несет ответственность за оплату доставки.
• Великобритания розничные покупатели получают бесплатную доставку при покупке на сумму 75 долларов и более. Все посылки отправляются с уплатой пошлин, таможенных пошлин и налогов.
• Бразилия к сожалению, в настоящее время мы приостановили будущие поставки в Бразилию.

^** ОБРАТИТЕ ВНИМАНИЕ: Бесплатная международная доставка не включает нашу оптовую категорию и все отдельные товары, вес в упаковке которых превышает 4,4 фунта.Plant Therapy выберет способ доставки для международных отправлений, для которых предусмотрена бесплатная доставка.

Наша цель — помочь вам и вашей семье жить более счастливой и здоровой жизнью, в том числе сделать так, чтобы вы были полностью удовлетворены своей покупкой. Если по какой-либо причине вы недовольны своим продуктом Plant Therapy, мы предлагаем 100% гарантию возврата денег в течение 90 дней с момента покупки. Прошло больше 90 дней? Не волнуйтесь, мы по-прежнему будем рады зачислить на ваш счет сумму возврата.

Заполните форму ЗДЕСЬ , чтобы начать процесс возврата. Обработка возврата может занять до 5 рабочих дней.

Обратите внимание, что массовые заказы не подлежат возврату, замене, обмену или возмещению, если продукт не был поврежден при транспортировке. Если по какой-либо причине вы чувствуете, что есть проблемы с качеством вашей наливной нефти, мы просим вас уведомить нашу команду по оптовым продажам в течение 10 дней с момента доставки и отправить небольшой образец обратно для тестирования.

Оптовая торговля: 1-888-912-6293
Электронная почта: [электронная почта защищена]
Часы работы: понедельник-четверг с 6:00 до 17:00.и пятница с 6:00 до 16:00.

Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки своего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.